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2013年02月22日11:39 | 中國發展門戶網 www.chinagate.cn | 給編輯寫信 字號：T|T

附 錄 E

(規范性附錄)

糞大腸菌群儀器快速檢測法

E.1　原理

糞大腸菌群儀器快速檢測法，基于糞大腸菌群能產生β-半乳糖苷酶，分解鄰-硝基苯/酚-β-D-吡喃半乳糖苷(o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，ONPG)使培養液呈黃色，通過光度檢測及數據轉換處理，得出單位體積(mL)或質量(g)糞便樣品中含有的糞大腸菌群濃度值。

依單位體積(mL)或質量(g)糞便樣品中含有的糞大腸菌群濃度值，換算成檢出1CFU糞大腸菌的樣品量，即糞大腸菌菌值。

E.2　設備與培養基

E.2.1　糞大腸菌群快速檢測儀

E.2.1.1　儀器技術性能

儀器技術性能應符合下列要求：

a)進樣體積：0.2 mL～5 mL；

b)測量范圍：100 CFU/100 mL ～1.0×1011 CFU/100 mL；

c)最低檢出限：100 CFU/100 mL；

d)培養溫度：36.5 ℃±0.5 ℃或44.5 ℃±0.5 ℃；

e)檢測周期：≤12 h。

E.2.1.2　儀器電源

儀器電源要求如下：

依現場實際情況分別可選擇220V交流電源與12V直流電瓶電源。

E.2.1.3　糞大腸菌群快速檢測儀應用培養基成分

糞大腸菌群快速檢測儀應用培養基成分如下：

a)蛋白胨：10.0 g；

b)氯化鈉：5.0 g；

c)鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)：0.15 g；

d)N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽(HEPES鈉鹽)：25.0 g(pH調至7.0±0.1)；

e)乳糖：5.0 g；

f)酵母膏：5.0 g；

g)氯化鎂：0.3 g；

h)蒸餾水：1000 mL。

將上述a)～g)加入h)中溶解，調pH至7.0±0.1，混勻，分裝至5 mL帶蓋玻璃瓶中，115 ℃±1 ℃，滅菌20 min。儲存于4 ℃暗處備用。

E.2.1.4　生理鹽水稀釋液

生理鹽水稀釋液成分如下：

a)氯化鈉：8.5 g；

b)蒸餾水：1 000 mL。

將成分a)溶解于蒸餾水中，分裝到錐形瓶內，121 ℃，20 min 滅菌備用。

E.2.1.5　0.03mol/L磷酸鹽稀釋液

0.03mol/L磷酸鹽稀釋液成分如下：

a)無水磷酸氫二鈉：2.83 g；

b)磷酸二氫鉀：1.36 g；

c)蒸餾水：1 000 mL。

將成分a)和 b)溶解于少量蒸餾水中，待完全溶解后，加蒸餾水至1 000 mL，121 ℃，20 min 滅菌備用。

E.2.2　其他器材

5 mL、1 mL可調加樣槍與滅菌槍頭、滅菌采樣瓶、冰箱。

E.3　操作步驟

E.3.1　開機預熱30min，查看歷史數據界面溫度，確認溫度使溫度達到測量要求并穩定。

E.3.2　將樣品混合均勻，用加樣槍取0.2mL待檢樣品，加入到內含5mL培養液的檢測瓶中，混合均勻，記錄編號并放入對應的檢測槽中。

E.3.3　關閉儀器培養區后，在主界面下按下 “開始測試”鍵，進入測試界面，輸入樣本信息，按下“運行”鍵，開始檢測運行。

E.3.4　檢測運行時間一般不超過12h，儀器將測試結果自動儲存備查并打印至記錄紙帶上。

E.3.5　樣品色度、渾濁度高時，可用生理鹽水(8.5 g/L)、0.03mol/L磷酸鹽稀釋液、脫氯滅菌自來水進行10倍稀釋。

E.3.6　操作全過程應符合無菌操作要求。

E

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